1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動物源食品克拉維酸殘留量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定和確證方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬肉、豬肝、豬腎、牛肉、牛肝和牛奶等動物源食品中克拉維酸殘留量的測定和確證。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的心版本。凡是不注明日期的引用文件，其心版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3 方法提要

試樣中殘留的克拉維酸用pH6.0的三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液-乙腈提取，二氯甲烷-正己烷液液分配凈化，分子篩超濾，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀檢測和確證，外標(biāo)法定量。

4 試劑和材料

除特殊規(guī)定外，所用的試劑均為分析純，水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級水。

4.1 甲醇：HPLC級。

4.2 乙腈; HPLC級。

4.3 二氯甲烷。

4.4 正己烷。

4.5 酸性氧化鋁。

4.6 三羥甲基氨基甲烷(Tris)。

4.7 鹽酸。

4.8 pH6.0的5 mmol/L Tris緩沖溶液：稱取0.61g Tris(4.6)，用約900 mL水溶解，用鹽酸(4.7)調(diào)pH值6.0，定容至1000 mL

4.9 克拉維酸鉀(clavulanic acid potassium, CAS號：61177-45-5)標(biāo)準(zhǔn)品，純度大于等于99%。

4.10 標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，5000 mg/L：稱取59.5mg克拉維酸鉀(相當(dāng)于50 mg克拉維酸)標(biāo)準(zhǔn)品(4.9),用少量pH6.0的5 mmol/L Tris緩沖溶液(4.8)溶解，再用乙腈(4.2)定容至10mL容量瓶，-30℃下避光保存。

4.11 標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，5 mg/L：吸取0.1 mL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(4.10)于100 mL容量瓶，用乙腈定容至刻度，充分混勻，配制成5 mg/L標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，此標(biāo)準(zhǔn)溶液需于分析前臨時配制。

4.12 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)靈敏度和使用需要，空白基質(zhì)提取液將標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(4.11)稀釋成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，此標(biāo)準(zhǔn)工作溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。空白基質(zhì)提取液為不含克拉維酸的空白樣品按7.1步驟提取后得到。

4.13 超濾離心管，帶相對分子質(zhì)量30 000的分子篩。

5 儀器與設(shè)備

5.1 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源。

5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.3 旋渦混合器。

5.4 低溫離心機：轉(zhuǎn)速不低于5000r/min，可制冷到-4℃。

5.5 均質(zhì)器：轉(zhuǎn)速不低于10 000 r/min。

5.6 pH計。

6 樣品制備與保存

6.1 制樣要求

制樣操作過程中應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。

6.2 動物肌肉、肝臟和腎臟

從所取全部樣品中取出有代表性樣品可食部分約500 g，用組織搗碎機充分搗碎均勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于-18℃以下冷凍存放。

6.3 牛奶樣品

從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500 g，充分混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于-18℃以下冷凍存放。

7 測定步驟

7.1 樣品提取

7.1.1 肌肉、肝臟、腎臟

稱取約5g試樣(至0.01g)，于50 mL離心管中，加入約2g酸性氧化鋁(4.5)，再加入5. 0 mL pH6.0的5 mmol/L Tris緩沖溶液(4.8)和9.0 mL乙腈(4.2)，振蕩提取5 min, 10℃以下以5000r/min離心5 min，移取上清液至另一50 mL離心管，加入20mL正己烷-二氯甲烷(2+1)混和溶液，振蕩約2min, 10℃以下以5000r/min離心5 min，取下層(水相)清液至15 mL離心管，用水定容至10 mL，振蕩混勻，取約1 mL于超濾離心管中離心過濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

7.1.2 牛奶

稱取約5g試樣(至0.01g)，于50 mL離心管中，加入約2g酸性氧化鋁(4.5)，再加入1.0mL pH6.0的5 mmol/L Tris緩沖溶液(4.8)和9.0 mL乙腈(4.2)，振蕩提取約5 min, 10℃以下以5000r/min離心5 min，移取上清液至另一50 mL離心管，加入20 mL正己烷-二氯甲烷((2+1)混和溶液，振蕩約2 min, 10℃以下以5000r/min離心5 min，取下層(水相)清液至15 mL離心管，用水定容至10 mL，振蕩混勻，取約1 mL于超濾離心管中離心過濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

文章來源：《食品化妝品檢驗卷無機元素和放射元素及其他檢測方法》

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